消光系數
實驗背景
消光系數為在給定波長、溶劑和溫度等條件下，吸光物質在單位濃度、單位液層厚度時的吸光度。被測溶液濃度高，溶液顯色后顏色深，對光吸收大，光透射率低，反之就小。消光系數是蛋白產品特有的常數，也是ICH Q6B建議建立的相關標準的基礎。消光系數可以通過對相應蛋白的氨基酸分析結果計算得出，也可以通過蛋白序列信息獲取。雖然后者較為方便快捷，但實際應用中也有局限。由于重組蛋白類藥物大部分是基因工程技術得到的融合蛋白或者突變體，其吸光系數無法查到；且在蛋白成品藥物中，輔料和添加劑的加入可使得樣品的pH值發生變化，影響酪氨酸殘基的離子態，進而影響蛋白的吸光度。所以，想要得到準確的消光系數，常采用氨基酸分析法。
本實驗對蛋白質樣品進行酸水解處理，斷開高級結構和肽鍵，得到游離的氨基酸。再使用Agilent自動衍生系統及衍生試劑對氨基酸進行柱前衍生，得到氨基酸定量結果。再根據朗伯-比爾定律及未水解蛋白樣品的紫外吸收值計算得出消光系數值。
適用樣本
蛋白類樣品為主
主要設備
1260 InfinityⅡ hplc, Aglient等液相系列
送樣要求
建議提供≥2 mg的目標成分，額外提供10 ml以上的空白buffer。
如樣品含有復雜輔料成分，需要跟對應商務溝通后確認具體送樣要求。
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