產品介紹
iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)和TMT(Tandem Mass Tags)技術是分別由美國AB Sciex公司和Thermo公司研發的多肽體外標記定量技術，采用多種同位素的標簽，可與氨基(包括氨基酸N端及賴氨酸側鏈氨基)反應實現連接，通過高精度質譜分析，同時實現多個樣本蛋白組的定性和定量。
iTRAQ/TMT試劑由三部分組成：報告基團、平衡基團和反應基團。反應基團形成2-18種等質量同位素標簽。iTRAQ/TMT試劑標記酶解后的肽段的N端及賴氨酸側鏈氨基。在MS/MS分析中，每個同量異序標簽都能夠產生一個獨特的離子圖譜，因此可以利用該標簽進行定量。在一級質譜分析中，標記的多肽是無法彼此區分出來的。然而，在二級質譜模式下，報告基團、平衡基團和反應基團之間的鍵斷裂，帶不同同位素標簽的同一肽段產生質量不同的報告離子。通過比較二級譜圖中的不同報告離子的強度就可以對蛋白進行定量。
技術優勢
? 適用范圍廣
可檢測到的蛋白除了胞漿蛋白外，還有線粒體蛋白、膜蛋白和核蛋白。也能對任何類型的蛋白質進行鑒定，包括高分子量、酸性、堿性蛋白質。
? 高通量
一次可以實現多個樣品的定性定量分析，特別適用于采用多種處理方式或來自多個處理時間的樣本的差異蛋白分析。
? 結果可靠
基于高靈敏度和高分辨的串聯質譜方法，定性與定量同步進行，同時得出定性和定量結果，重復樣品間的蛋白表達量相關性高。
? 靈敏度高
分級分離，降低樣品復雜度，相比凝膠電泳觀測到的蛋白變化在2倍以上，iTRAQ計算出的蛋白變化在通常1.3-1.6倍之間，可檢測低豐度蛋白。
? 分離能力強
可分離出酸/堿性蛋白，小于10KDa或大于200KDa的蛋白、難溶性蛋白等。
? 自動化程度高
液質聯用，自動化操作，分析速度快，分離效果好。
樣本要求
動物及臨床組織標本 | 50 mg/sample |
血清、血漿 | 200 μL/sample |
細胞、微生物 | 1×10^7cells/sample |
植物嫩葉、嫩芽 | 200 mg/sample |
植物種子、果實 | 500 mg/sample |
液氮或-80°C保存
足量干冰運輸，避免反復凍融
檢測平臺
應用方向
? 疾病機制與標志物研究：解析疾病發生發展的關鍵蛋白與通路；篩選疾病診斷、進展及藥物療效預測標志物。
? 藥物研發與機制解析：發現藥物靶點，闡明藥物作用通路與分子機制；評估藥物副作用，優化藥物設計。
? 蛋白質互作與網絡分析：構建蛋白互作網絡，解析細胞信號傳導機制；鑒定蛋白復合物組成與功能動態變化。
? 農業與畜牧業研究：挖掘作物抗逆相關蛋白，優化畜禽飼養策略；探索農產品成熟貯藏機制，改良品質。
? 微生物與環境科學研究：解析微生物群落代謝功能與環境適應機制；評估污染物生態毒理效應，支撐環境治理。
? 基礎生物學研究：探索細胞信號傳導、周期分化調控機制；分析蛋白質翻譯后修飾的功能調控作用。
案例應用
? 醫學方向
英文標題：Extended Multiplexing of Tandem Mass Tags (TMT) Labeling Reveals Age and High Fat Diet Specific Proteome Changes in Mouse Epididymal Adipose Tissue
發表期刊： Molecular & Cellular Proteomics
影響因子： 6.54
技術方法： TMT標記定量蛋白質組學
研究內容：肥胖癥是一種世界性流行病，與代謝并發癥如2型糖尿病、高血壓、血脂異常和動脈粥樣硬化的發病率增加有關。過去由于缺乏有效的高通量技術手段限制了對附睪組織的整個脂肪組織蛋白質組變化的研究。因而作者利用多組高通量TMT標記定量蛋白組技術對小鼠附睪組織的蛋白質組進行了深入的研究。
研究路線：
? 生信分析
? 農學方向
英文標題： Integrative analysis of transcriptome and proteome provides insights into adaptation to cadmium stress in Sedum plumbizincicola
發表期刊：Ecotoxicology and Environmental Safety
影響因子：6.292
技術方法：TMT標記定量蛋白質組學
研究內容：鎘(Cd)是對中國土壤安全威脅最嚴重的重金屬污染物之一，可與植物必需元素競爭并轉移到地上組織。它能引起植物DNA損傷，產生活性氧自由基，影響植物的生長和發育。伴礦景天(Sedum plumbizincicola)是具有鎘超富集能力的植物之一，能在地上部組織中積累大量鎘元素而不呈現毒害癥狀，在土壤重金屬污染治理中具有重要應用價值。然而，調控這一過程的分子機制還不完全清楚。作者首次應用TMT定量蛋白質組技術并結合已報道的轉錄組學數據，探究伴礦景天對鎘的耐受和積累的分子機制。
研究成果：
歡迎下載“iTRAQ/TMT標記定量蛋白質組研究”資料包，內容包括：
iTRAQ/TMT標記定量蛋白質組研究綜合解決方案，數據分析軟件，質譜檢測技術及介紹，全面的聯用技術等。
